PRÁCTICA 22

TINCIÓN DE GRAM

Material:

-Portaobjetos.

-Mechero de alcohol.

-Asa de siembra.

-Pinza de madera.

-Vaso de precipitados.

-Frasco lavador.

-Pipeta Pasteur.

-Placa Petri (contenida un cultivo de la práctica anterior).

- Reactivos: Cristal violeta; Safranina; Solución de Lugol; Alcohol-Acetona

-Microscopio óptico.

-Aceite de inmersión.

Procedimiento:

1) Verter un poco de agua destilada sobre un vaso de precipitados.

2) Con ayuda de una pipeta Pasteur verter 1-2 gotas de agua sobre el portaobjetos.

3) Esterilizar el asa de siembra con ayuda de un mechero de alcohol.

4) Coger una muestra contenida en la placa Petri con el asa de siembra.

5) Realizar un frotis sobre el portaobjetos.

6) Fijar el frotis por calor.

7) Cubrir la preparación con Cristal Violeta y dejar actuar durante 1 minuto.

8) Lavar el exceso de colorante, suavemente, con agua destilada.

9) Cubrir la preparación con líquido de Lugol y escurrir.

10) Volver a cubrirla con líquido de Lugol y dejar actuar durante 1 minuto.

11) Lavar con agua.

12) Decolorar dejando caer Alcohol-Acetona gota a gota sobre el portaobjetos inclinado. No superar un minuto con la decoloración.

13) Lavar con agua (opcional).

14) Cubrir la preparación con safranina dejando actuar 1 minuto.

15) Lavar suavemente para eliminar el exceso de colorante.

16) Secar y observar al microscopio con objetivo de inmersión.

Resultado:

Observamos Staphylococcus en racimo; bacterias Gram positiva, ya que se observa de color rosado-azul.